雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)（Dual-luciferase reporter assay，DLR）是一種在生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用的技術(shù)，主要用于解析基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制，可定量評估轉(zhuǎn)錄因子與靶基因啟動(dòng)子的相互作用及啟動(dòng)子活性。

技術(shù)原理

該實(shí)驗(yàn)通常使用螢火蟲熒光素酶（Fire?y Luciferase）和海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）雙報(bào)告系統(tǒng)：

?螢火蟲熒光素酶基因常作為報(bào)告基因，與目標(biāo)基因的啟動(dòng)子序列構(gòu)建在同一載體上，其表達(dá)直接受目標(biāo)啟動(dòng)子調(diào)控。

?海腎熒光素酶基因作為內(nèi)參基因，由組成型啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)，在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)。

當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染含有這兩種基因的載體后，加入相應(yīng)的熒光素底物，兩種熒光素酶會(huì)催化底物發(fā)光。通過檢測兩種熒光信號的強(qiáng)度比值（Luc/Ren），可歸一化處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，消除細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞活性等因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，從而準(zhǔn)確反映目標(biāo)啟動(dòng)子的活性。

適用場景

?轉(zhuǎn)錄因子與調(diào)控序列的互作驗(yàn)證

?miRNA與靶mRNA的互作驗(yàn)證

?miRNA與IncRNA的靶向互作驗(yàn)證

?轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控活性分析

?啟動(dòng)子活性檢測

?啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)功能分析

?啟動(dòng)子單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析

技術(shù)流程